中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准
食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验 GB 4789.11-94
溶 血 性 链 球 菌 检 验
代替GB 4789.11-84
Microbiological examination of food hygiene
Examination of Streptococcus hemolyticus
----------------------------------------------------------------------
1 主题内容与适用范围
本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。
本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球菌的检验。
2 引用标准
GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂
3 设备和材料
3.1 温箱:36±1℃。
3.2 水浴:36±1℃。
3.3 显微镜。
3.4 离心机。
3.5 试管架。
3.6 灭菌平皿。
3.7 灭菌小试管。
3.8 载玻片。
3.9 灭菌吸管:1mL、10mL。
3.10 灭菌镊子
3.11 均质器。
3.12 酒精灯。
3.13 接种环。
4 培养基和试剂
4.1 葡萄糖肉浸液肉汤:按GB 4789.28中4.1规定。在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。
4.2 肉浸液肉汤:按GB 4789.28中4.1规定。
4.3 区克氏肉汤:按GB 4789.28中4.62规定。
4.4 血琼脂平板:按GB 4789.28中4.6规定。
4.5 人血浆。
4.6 0.25%氯化钙。
4.7 灭菌生理盐水。
4.8 杆菌肽药敏纸片(含0.04单位)。
5 检验程序
┌───────────── ─┐
│ 检样 │
│25g（ml）＋225ml灭菌生理盐水│
└──┬───── ────┬─┘
┌────┴─── 36±１℃ ┌─┴───┐
│葡萄糖肉侵液肉汤├─────┤ 血平板 │
│或匹克氏肉汤 │ │ │
└────────┘ └──┬──┘
36±１℃│24H
┌────┴────┐
│血干板（分纯培养）│
└────┬────┘
36±１℃│24H
┌────────┬───────┼─────┐
┌─┴───┐┌───┴───┐┌──┴─┐┌──┴──┐
│链激酶试验││杆菌肽敏感试验││观察溶血││革兰氏染色│
└──┬──┘└─────┬─┘└─┬──┘└──┬──┘
└─────────┼────┴──────┘
┌─┴──┐
│ 报告 │
└────┘
6 操作步骤
6.1 样品处理
称取25g固体检样;称取25mL液体检样,加入225mL灭菌生理盐水,研成匀浆制成混
悬液。
6.2 一般培养
将上述混悬液吸取5ml,接种于50mL葡萄糖肉浸液肉汤;或直接划线接种于血平板,
如检样污染严重,可同时按上述量接种匹克氏肉汤,经36±1℃培养24h,接种血平板,
置36±1℃培养24h,挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落,在血平板上分纯,然后观察
溶血情况及革兰氏染色,并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。
6.3 形态与染色:
本菌呈球形或卵圆形,直径0.5～1μm,链状排列,链长短不一,短者4～8个细胞组成, 长者20～30个,链的长短常与细菌的种类及生长环境有关;液体培养中易呈长链;在
固体培养基中常呈短链,不形成芽孢,无鞭毛,不能运动。
6.4 培养特性
该菌营养要求较高,在普通培养基上生长不良,在加有血液、血清培养基中生长较
好。溶血性链球菌在血清肉汤中生长时管底呈絮状或颗粒状沉淀。血平板上菌落
为灰白色,半透明或不透明,表面光滑,有乳光,直径约0.5～0.75mm,为圆形突起的细
小菌落,乙型溶血链球菌周围有2～4mm界限分明、无色透明的溶血圈。
6.5 链激酶试验
致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶(即溶纤维蛋白酶),此酶能激活正常人体
血液中的血浆蛋白酶原,使成血浆蛋白酶,而后溶解纤维蛋白。
吸取草酸钾血浆0.2mL,加0.8mL灭菌生理盐水,混匀,再加入18～24h36±1℃培养
的链球菌培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL(如氯化钙已潮解,可适当加大至
0.3%～0.35%),振荡摇匀,置于36±1℃水浴中10min,血浆混合物自行凝固(凝固程度
至试管倒置,内容物不流动)。然后观察凝固块重新完全溶解的时间,完全溶解为阳
性,如24h后不溶解即为阴性。
草酸钾人血浆配制:草酸钾0.01g放入灭菌小试管中,再加入5mL人血,混匀,经离
心沉淀,吸取上清液即为草酸钾人血浆。
6.6 杆菌肽敏感试验
挑取乙型溶血性链球菌液,涂布于血平板上,用灭菌镊子夹取每片含有0.04单位的
杆菌肽纸片,放于上述平板上,于36±1℃培养18～24h,如有抑菌带出现即为阳性。
同时用已知阳性菌株作为对照。
----------------------------------------------
附加说明:
本标准由卫生部卫生监督司提出。
本标准由北京市卫生防疫站负责起草。
本标准主要起草人刘以贤。
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。
------------------------------------------------------------------------
中华人民共和国卫生部1994-03-18批准 1994-09-01实施