中华人民共和国国家标准

食品卫生微生物学检验 GB 4789.7-94

副溶血性弧菌检验代替GB 4789.7-84

Microbiological examination of food hygiene

Examination of Vibrio parahaemolyticus

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1 主题内容与适用范围

本标准规定了副溶血性弧菌检验方法。

本标准适用于食品和食物中毒样品中副溶血性弧菌的检验。

2 引用标准

GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂

3 设备和材料

3.1 试管:20mm×200mm,15mm×100mm。

3.2 吸管:1mL,5mL,10mL。

3.3 平皿:皿底直径90mm。

3.4 广口瓶或三角瓶。

3.5 电动均质器或乳钵。

3.6 酒精灯。

3.7 接种灯和接种环。

3.9 试管架。

3.10 载玻片。

3.11 温箱。

3.12 显微镜。

4 培养基和试剂

4.1 氯化钠结晶紫增液:按GB 4789.28中4.39规定。

4.2 氯化钠蔗糖琼脂:按GB 4789.28中4.40规定。

4.3 嗜盐菌选择性琼脂:按GB 4789.28中4.41规定。

4.4 3.5%氯化钠三糖铁琼脂:按GB 4789.28中4.42规定。

4.5 氯化钠血琼脂:按GB 4789.28中4.43规定。

4.6 嗜盐性试验培养基:按GB 4789.28中4.44规定。

4.7 3.5%氯化钠生化试验培养基:按GB 4789.28中4.45规定。

4.8 革兰氏染色液:按GB 4789.28中2.2规定。

4.9 甲基红试剂:按GB 4789.28中3.4规定。

4.10 靛基质试剂:按GB 4789.28中3.13规定。

4.11 V-P试剂:按GB 4789.28中3.4规定。

5 检验程序

副溶血性弧菌检验程序如下:

┌─────────────┐

│ 样品25g │

│加225mL3.5％灭菌盐水，磨碎│

└─┬──────┬────┘

┌─────┴┐ ┌ ─ ─┴──────┐

│氯化钠结晶紫│ │氯化讷遮糖琼脂平板 │

│增菌液100ml │ │和选择性琼脂平板 │

└──────┘ └──┬──── ─ ─┘

┌───┴───────┐

│3.5％氯化钠三糖铁斜面 │

└┬───┬──────┘

┌────────┴┐┌─┴───────┐

│主氏染色镜检形态 ││主氏染色镜检形态 │

└───────┬─┘└┬────────┘

┌┴───┴┐

│ 生化试验 │

└──┬──┘

┌──┴──┐

│ 动物试验 │

└──┬──┘

┌──┴──┐

│ 报告 │

└─────┘

6 操作步骤

6.1 分离培养:首先称取样品25g,加225mL 3.5%灭菌盐水,用均质器打碎或用乳钵磨

碎,接种氯化钠琼脂平板和嗜盐菌选择性琼脂平板各1个,同时取10mL,加入100mL增

菌液中,放37 ℃ 8～16h培养后,涂上述平板进行分离,于37℃ 18～24h培养后取出观

察。

6.2 挑取上述可疑菌落,转种3.5%氯化钠三糖铁斜面,37℃、24h观察结果。

6.3 涂片镜检:将三糖铁培养基反应可疑者(底层变黄葡萄糖产酸不产气,斜面不变

乳糖蔗糖不分解,有动力,不产生硫化氢)进行涂片革兰氏染色镜检形态。

6.4 嗜盐性试验:将上述可疑培养物分别接种于不同浓度的盐胨水中,37℃ 24h培养

后观察生长情况,在无盐和10%以上盐的胨水中不生长,在7%盐的胨水中生长良好者

进行下列有关试验。

6.5 生化试验:分别接种各类生化培养基,放37℃,除V-P、靛基质、甲基红试验培

养48h后加试剂观察外,其他均可在24h观察。

表1 副溶血性弧菌的生化学性状

┌───────┬──────┐

│葡萄糖产酸＋ │v-p － │

│葡萄糖产气＋ │靛基质－ │

│遮糖－ │赖氨酸＋ │

│乳糖－ │鸟氨酸＋/- │

│ 甘露醇＋ │精氨酸 - │

│ 硫化氢－ │溶血 +/- │

│ 甲基红＋ │ │

└───────┴──────┘

注:+阳性;-阴性;+/-多数阳性,少数阴性。

表2 副溶血性弧菌主要性状与其他弧菌的鉴别

┌──────────┬───────────────────────────┬────┐

│ 名称 │ 葡阿 β 无│盐胨水│

│ │氧萄赖精鸟靛明V 乳蔗甘肌拉甘鼠半硝泳盐│ │

│ │化糖氨氨氨基 I 露伯露李乳酸胨├────┤

│ │酶产酸酸酸质胶 P糖糖醇醇胶糖糖糖盐动水 │6 8 10│

│ │ 气糖苷 │ │

├──────────┼───────────────────────────┼────┤

│ 副溶血性弧菌 │＋－＋ - + + + - - － + - d + - - + d -│+ + - │

│V. Parahaemolyticus │ │ │

│ 溶藻性弧菌 │＋－ + - + + + + - + ＋ - - + - - + + -│+ + + │

│V.alginolyticus │ │ │

│ O1霍乱弧菌 │＋－ + - + + + d (d) + ＋ - - + - + + - + │d - - │

│V.cholerae0 │ │ │

│ 非O1，霍乱弧菌│＋－ + - + + + d (d) + + - - d - + + - +│d - - │

│V.choleraeO1 │ │ │

│ 拟态弧菌 │＋－ + - + + + - (d) - + - - + - + + - + │d - - │

│V.mimcus │ │ │

│ 河孤菌 │＋ d - + - d + - - + + - + d d + + - - │+ + d │

│V.fliislis │ │ │

│ 创伤弧菌 │＋ - + - + + + - + d d - - + - + + - - │d - - │

│V.uuluificus │ │ │

│ 梅氏弧菌 │－ - d + - d + + d + + d - d - - - - - │d - - ││V.metschnikouii │ │ ││ 霍利斯弧菌 │＋ - - - - + - - - - - - + + - + + - - │d - - ││V。hollisae │ │ ││V.damsela │＋ - d + - - - + - - - - - + - + + - -│d - - │└──────────┴───────────────────────────┴─ ── ─┘注:+90%以上阳性;-90%以上阴性;dll%～89%阳性,(+)迟缓阳性;(d)11%～89%迟缓阳性。7 动物试验将上述各类反应的副溶血性弧菌接种3.5%氯化钠胨水,经37℃ 16～18h培养后,小鼠

腹腔注射0.3mL,观察2～3d,将死亡小鼠进行解剖并做分离培养。

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附加说明:

本标准由卫生部卫生监督司提出。

本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。

本标准主要起草人周桂莲。

本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。

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中华人民共和国卫生部1994-03-18批准 1994-09-01实施

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